Elektrofores: vad det är, vad det är till för och hur det görs

Innehåll

• Vad är det för
• Hur det görs
• Typer av elektrofores
• 1. Hemoglobinelektrofores
• 2. Proteinelektrofores

Elektrofores är en laboratorieteknik som utförs i syfte att separera molekyler enligt deras storlek och elektriska laddning så att diagnos av sjukdomar kan göras, proteinuttryck kan verifieras eller mikroorganismer kan identifieras.

Elektrofores är ett enkelt och billigt förfarande som används i laboratorierutin och i forskningsprojekt. Enligt syftet med elektrofores kan det vara nödvändigt att utföra andra tester och undersökningar för att till exempel få en diagnos.

Vad är det för

Elektrofores kan utföras för olika ändamål, både i forskningsprojekt och vid diagnos, eftersom det är en enkel och billig teknik.Således kan elektrofores utföras för att:

• Identifiera virus, svampar, bakterier och parasiter, med denna applikation vanligare i forskningsprojekt;
• Faderskapstest;
• Kontrollera uttrycket av proteiner;
• Identifiera mutationer, till exempel användbara vid diagnos av leukemi;
• Analysera typerna av cirkulerande hemoglobin, vara användbara vid diagnos av sigdcellanemi;
• Bedöm mängden proteiner som finns i blodet.

Enligt syftet med elektroforesen kan det vara nödvändigt att utföra andra kompletterande tester för att läkaren ska kunna slutföra diagnosen.

Hur det görs

För att utföra elektrofores krävs gelén, som kan vara polyakrylamid eller agaros beroende på syftet, elektroforesbuffert och kärl, molekylviktsmarkör och ett fluorescerande färgämne, förutom en UV- eller LED-ljusutrustning, även känd som en transilluminator.

Efter beredning av gelén måste ett specifikt föremål placeras så att brunnarna görs i gelén, populärt kallad kammen, och låta gelén stelna. När gelén är klar, applicera bara ämnena på brunnarna. För detta måste en molekylviktsmarkör placeras i en av brunnarna, en positiv kontroll, som är ämnet som är känt vad det är, en negativ kontroll som garanterar reaktionens giltighet och de prover som ska analyseras. Alla prover måste blandas med ett fluorescerande färgämne, eftersom det på detta sätt är möjligt att visualisera banden på transilluminatorn.

Gelén med proverna måste placeras i elektroforesbehållaren, som innehåller den specifika buffertlösningen, och sedan slås enheten på så att det finns elektrisk ström och därmed potentialskillnad, vilket är viktigt för separationspartiklarna enligt deras belastning och storlek. Den elektroforetiska körtiden varierar beroende på syftet med proceduren och kan pågå i upp till 1 timme.

Efter den angivna tiden är det möjligt att se resultatet av den elektroforetiska körningen genom transilluminatorn. När gelén placeras under UV- eller LED-ljus är det möjligt att visualisera bandningsmönstret: ju större molekyl, desto mindre migrering blir den närmare källan, medan ju lättare molekylen är, desto större är migrationspotentialen.

För att reaktionen ska kunna valideras måste banden för den positiva kontrollen visualiseras och ingenting måste visualiseras i den negativa kontrollen, eftersom det annars är en indikation på att det var kontaminering och hela processen måste upprepas.

Typer av elektrofores

Elektrofores kan utföras för olika ändamål och enligt dess syfte kan flera typer av gel användas, den vanligaste är polyakrylamid och agaros.

Elektrofores för att identifiera mikroorganismer är vanligare att utföras i forskningslaboratorier, men för diagnostiska ändamål kan elektrofores användas för att identifiera hematologiska sjukdomar och sjukdomar som utvecklas med ökningen i mängden proteiner, som är de viktigaste typerna av elektrofores:

1. Hemoglobinelektrofores

Hemoglobinelektrofores är en laboratorieteknik som utförs för att identifiera de olika typerna av hemoglobin som cirkulerar i blodet, vilket gör det möjligt att identifiera förekomsten av sjukdomar relaterade till hemoglobinsyntes. Typen av hemoglobin identifieras med hjälp av elektrofores vid ett specifikt pH, helst mellan 8,0 och 9,0, med ett bandmönster som kan jämföras med det normala mönstret, vilket möjliggör identifiering av onormala hemoglobiner.

Vad den är gjord för: Hemoglobinelektrofores utförs för att undersöka och diagnostisera sjukdomar relaterade till hemoglobinsyntes, såsom sicklecellanemi och hemoglobin C-sjukdom, förutom att de är användbara för att differentiera talassemi. Lär dig hur man tolkar hemoglobinelektrofores.

2. Proteinelektrofores

Proteinelektrofores är en undersökning som läkaren begär för att bedöma mängden proteiner som cirkulerar i blodet och därmed identifiera sjukdomar. Denna undersökning görs från ett blodprov, som centrifugeras för att erhålla plasma, den del av blodet som bland annat består av proteiner.

Efter elektrofores kan ett bandmönster visualiseras och därefter ett diagram där kvantiteten av varje fraktion av proteiner anges, vilket är grundläggande för diagnosen.

Vad den är gjord för: Proteinelektrofores gör det möjligt för läkaren att undersöka förekomsten av multipelt myelom, uttorkning, cirros, inflammation, leversjukdom, pankreatit, lupus och högt blodtryck enligt bandmönstret och grafen som presenteras i undersökningsrapporten.

Förstå hur det görs och hur man förstår resultatet av proteinelektrofores.